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HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH7.2-7.4范畴内具备不错的缓冲能力。其较大特点是在敞开式培养或细胞观测时要保持较稳定的PH值。在这类培养标准下，细胞培养瓶的瓶盖应扭紧，以避免培养液中常需的小量碳酸盐散入空气中。
hepes缓冲液使用方法：
①hepes缓冲液可按需要的浓度立即添加到配置的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中添加2.38克HEPES，待溶后用lNNaOH调pH至7.2，滤过除菌后应用，这时HEPES的应用浓度为10mmol/L。
②也可以配出100x贮存液（lmol/L），应用前取99ml培养液添加lml贮存液，z后运用浓度仍为10mmol/L。lmol/L（100x）hepes缓冲液配置方式：取23.8gHEPES溶解90ml双蒸水中，用lNNaOH调pH至7.5一8.0，随后用水滴定剂至100ml，过滤除菌，散装瓶子（2ml/瓶），4℃或-20℃储存。
HEPES粉末耐高温，熔点高达200℃，因此不会因高压灭菌而降解。根据相关文献，如果将HEPES水溶液暴露于环境光下三小时，会产生细胞毒性的过氧化氢（H2O2）因此应注意：1.HEPES水溶液必须远离光线以免影响实验结果。而配置成溶剂后，要在4℃下保存，建议在短期内使用效果更佳!
Hepes缓冲液的使用及注意事项