在一些分析实验中,缓冲溶剂成为了不可缺少的溶液,之所以很重要,就是因为性能的特殊,它可以对外界因素的干扰有一定的抵抗性。正如在生化反应中,很多时候需要一个稳定的酸碱环境,不能因外界物质的添加而有所改变,而缓冲液就可以达到稳定PH值的目的,使得检测物在适应的环境下生存反应,保证实验进程。所以在各类实验里,操作人员需要慎重进行选择和配制,下面先重点给大家介绍一下常用缓冲液的配制方法。
一、缓冲液制备
如果需要配制一定酸碱性的溶剂,s先依据情况必须选定是弱酸性溶液还是强碱性溶液,它的pKa值也需要尽可能地接近所需配制溶液的pH值,然后计算酸碱的浓度比,根据此浓度比再进行配制即可。
二、缓冲液配制
1、PBS缓冲液
PBS的缓冲PH范围较为广泛,它可以用于配置不同酸碱性的溶液,也是很常见的缓冲体系。此溶液的配置方法会分情况,如果是酸性溶液可直接用NaH₂PO₄或KH₂PO₄进行混合即可,PH范围在1-5之间;若是碱性溶液则需使用Na₂HPO₄或K₂HPO₄配制,PH范围在9-12之间。
2、Tris-HCl缓冲液
如果是使用1M的Tris-HCl,PH值范围在7.4-8.0之间配制溶液1000ml,其配制方法如下:
- 称取120g左右的 Tris倒进1000毫升的烧杯中;
- 然后加入800毫升左右的纯净水进行充分搅拌,直至完全溶解;
- 根据浓度计算表,加入适量的HCl,然后调节至所需要的PH值,将溶液定容至1000ml。
- 注意经过高温高压灭菌以后,室温保存。
3、 HEPES缓冲液
因其缓冲范围在中性范围内,可以在盛装器具敞开的情况下保持稳定的PH值,所以常被用于细胞培育和生化诊断试剂中。如果是要配置1M,pH值为7.0的溶液,其配制方法为:
- 大概称取120g的HEPES粉末,倒进容器中;
- 使用纯净水将其充分溶解在400mL的瓶中;
- 加入NaOH溶液混合,然后将pH值调整至7.0;
- 将溶液定容至500mL,常温下保存即可,注意即配即用;
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